ネットワークを通じて、クライアントコンピュータに保存されているデータをサーバコンピュータに転送することを指します。逆をダウンロードと言います。お客様の事務所やご自宅のパソコンから、インターネット上のファイルを設置できるレンタルサーバーなどに転送ソフトなどを使って転送する事自体をそう呼びます。
よくアップロードを短縮させて「アップする」と言う言い方をする事が多いです。専用のIDとPASSWORDがあればサーバーに接続する事ができるようになり、アップロードの際に同じ名前のファイルがあれば上書きされてしまう事になります。これによりファイルが新しい情報になり、WEBサイトなどがいわゆる「更新」された形になるのです。